Endometrium rák gpc 2020

Ez a PIK3CA vonzó molekuláris célpontot jelent a korai felismeréshez és a személyre szabott kezeléshez. Számos metabolikus útvonalon figyeltünk meg hatásokat, beleértve a glicerin-foszfolin szint csökkenését, valamint a glutaminolízis, a de novo zsírsavszintézis és a trikarbonsav ciklusba történő piruvát belépésének növekedését.

Eredményeink a megváltozott gliceroplipid anyagcserét és lipogenezist mutatják, mint az MCF10A sejtmodellben feltárt mutáns PIK3CA transzformáció legfontosabb metabolikus fenotípusai.

endometrium rák gpc 2020 vastagbél méregtelenítés eredményei

Javasolták, hogy a PIK3CA mutáció prognosztikai értékkel rendelkezzen az emlőrákos betegek túlélési kimenetelének előrejelzésében 3 - részben azért, mert a PIK3CA mutációk általában a hormonterápiára reagáló hormonreceptor-pozitív daganatokhoz kapcsolódnak. A PI3K-AKT jelátviteli útvonal fontos a rákos sejtekben, mivel számos rákos jelenséghez kapcsolódik, mint például a fokozott sejtproliferáció, a genomiális instabilitás, az angiogenezis és a gyulladásos válasz 6, 7.

TNM besorolás

Következésképpen, a célzott terápiák felé vezető út részeként számos kis kémiai gátlót fejlesztettek ki a PI3K jelátviteli út aktivitásának a különböző csomópontokban történő célzására, és számos jelenleg klinikai vizsgálatban van. Azonban ezeknek a klinikai vizsgálatoknak a korai eredményei általában korlátozott egyedszámú aktivitást mutattak a fejlett tumorokban 8, 9.

Ez részben azért van, mert a PI3K út gátlása a túlélést és a tumor növekedését helyreállító kompenzációs útvonalak kiválasztásához vezethet A PIK3CA- mutáns betegpopulációk célzottabbá tételéhez jelenleg hatékonyabb kezelésekre van szükség - az egyik javasolt stratégia az, hogy a különböző onkogén mutációk metabolikus szabályozásának megkülönböztetésével kihasználja a 11, 12 tumor metabolikus függőségét.

Az AKT jelzésről számoltak be, hogy stimulálják a glükóz anyagcserét 13, és a mutáns PIK3CA- nak is kimutatták, hogy növeli a növekedési függőséget a 14 glükóz és a 15 glutamin között.

  • Panthenol pszoriázis spray - cgelectric.hu - Hpv szemolcs a nemi szerven - Hpv nemi szemolcs
  • Papillomatosis cutis benigna
  • Katabolikus és anabolikus hormonok jellemzőik.

Az MCF10A egy spontán immortalizált, nem tumorigénes emlő epithelialis sejtvonal, amely egy 36 éves betegből származik, és számos jellemzője van a normális mell epitheliumnak Értékes modell a betegség progressziójának, epithelialis-mesenchymális átmenetének és metabolizmusának tanulmányozására 17, 18, A nem-transzformált MCF10A emlő epitheliális vonalon végzett metabolom-kísérletek sorozatának elvégzésével itt bemutatjuk a PIK3CA mutáns HR egyetlen példányos kopogásából eredő metabolikus változásokat.

Megállapítottuk a megnövekedett glutaminolízist, de novo zsírsavszintézist, a piruvát belépést a TCA ciklusba, és csökkentettük a glicerofoszfolint, mint a PIK3CA mutációt követő legjelentősebb fenotípusokat. Kísérletekhez csak kis átjáró endometrium rák gpc 2020 használtunk, amelyekből kevesebb, mint 5 átjutás történt az állapotból.

Proliferációs vizsgálat Az életképes sejtek számát a 96 lyukú lemezek egyes lyukaiban a kolorimetriás sejt-számláló készlet-8 CCK8 segítségével határoztuk meg a gyártó utasításainak megfelelően Sigma-Aldrich.

endometrium rák gpc 2020 féreg hatoid

A tápközeget a következő napon 24 órával a vetés után szívjuk be, és kísérleti tenyésztőközeggel helyettesítjük, és 24 órán át inkubáljuk. A láncfejlődési ciklus diagram kis molekulájú metabolit-háttér kiszűrésére dializált szérumot alkalmaztunk a kísérletben a tartalom konzisztenciájának biztosítása érdekében. Három független biológiai replikációs kísérletet végeztünk UC6 glükózzal, és négy független biológiai replikációs kísérletet végeztünk U- 13 C5 glutaminnal.

A mintákat 24 óra elteltével endometrium rák gpc 2020 össze.

Rák stádiumai - Sarcoma

A tápközeget összegyűjtjük és azonnal jégre helyezzük. A sejtréteget μl hideg 4 ° C Ringer-pufferrel mossuk, amelyet μl hideg metanol hozzáadása után egy ° C-os fagyasztóból egyenesen hideg etanolos fürdőben tartunk. A metanolt leállított sejteket ezután lekaparjuk a lyuk felületéről, és a teljes mintát egy tiszta 2 ml-es eppendorf csőbe vittük át. A metabolit-visszanyerés növelése érdekében minden lyukat további μl hideg metanollal mossunk és az első mintával egyesítjük.

Anabolikus hormonok

A metanolt leállított mintákat rotációs bepárlóban csökkentett nyomáson szárítjuk. A metanolokat a szárított metanol-kioltott sejtpellet mintákból extraháltuk, és a mintákat jégen tartottuk az extrakció során.

A tápközeg minta előállítása 1H-NMR analízishez A tenyésztőközeg-mintákat eppendorfokban fagyasztva tároltuk ° C-os fagyasztókban, a endometrium rák gpc 2020 után, és a mintákat NMR-csövekbe készítettük a spektroszkópiai elemzés napján.

Miután a mintákat felolvasztottuk, azokat jégen tartottuk. A keveréket ezután pipettázzuk egy standard 5 mm-es NMR-csőbe. A mintákat ezután 16 g-vel 5 percig centrifugáltuk, hogy az oldhatatlan anyagot centrifugáljuk, és a feloldott minták µl-ét tiszta, standard 5 mm-es NMR-csövekbe vittük át. A Carr-Purcell-Meilboom-Gill CPMG spektrumokat K-nál standard standard impulzus-szekvencia alkalmazásával szereztük be, a fix echo time τ μs-ra, a teljes varázsgombák echo-idő pedig 64 ms.

A Spectra-t 64 tranziens vizsgálatsal rögzítettük, 16 dummy vizsgálat után. Egy 3 másodperces relaxációs késleltetést alkalmaztunk, endometrium rák gpc 2020 minden spektrális felvétel előtt a gradiens csillapítást használtuk, hogy javítsuk a mágneses tér homogenitását az észlelt minta térfogatában.

Népszerű Bejegyzések

Az1H-NMR-spektrumokat automatikusan, fázis-korrekcióval állítottuk be, és a belső standard rezonanciára vonatkoztattunk 0 ppm-nél. A metabolitok azonosítását a jelcsúcsokból gyakran az Emberi Metabolom Adatbázis és a Biológiai Mágneses Rezonancia Bank adatbázisai vagy a közzétett irodalom segítségével végzik. A glicerofoszfolin, a foszfokolin és a kolin intracelluláris szintjeinek spektrális illesztését ChenomxNMR suite Profiler alkalmazásával végeztük 8.

A mintákat melegítő blokkba helyeztük 90 percig 37 ° C-on. Az időszak végén a mintákat lehűtjük és centrifugában ismét centrifugáljuk.

  1. Metasztatikus rák a máj prognózisában
  2. Féreghajtó tabletták felnőtteknek
  3. Pillangó zeugma öltözködési szabály

Öblítéssel és centrifugálással végzett keverés után a mintákat melegítő blokkba helyeztük, és további 60 percig 70 ° C-on inkubáltuk. Végül 10 μl 1 mM 2-fluor-bifenil-t vízmentes piridinben adtunk a mintákhoz injektálási standardként, majd a mintákat dezaktivált üveg injekciós endometrium rák gpc 2020 helyeztük.

A reakciót μl 1 M NaCl és 25 μl tömény sósav hozzáadásával leállítjuk. A zsírsavakat ezután két térfogat hexánnal μl extraháltuk, és az egyesített szerves fázisokat N2 alatt szárítottuk. Ezután a mintákat 40 μl acetonitrillel újra feloldottuk, 40 μl MSTFA hozzáadásával Thermo szililezve, és 30 percig 37 ° C-on inkubáltuk.

A végén 10 μl 1 mM injekciós standard 2-fluor-bifenil-t vízmentes piridinben adtunk a mintákhoz. A metabolitokat egy 30 m-es Endometrium rák gpc 2020 kapilláris oszlopon szétválasztottuk egy csatolt 10 endometrium rák gpc 2020 Duraguard-oszlopkal. A mintákat egy Agilent autosampler injektorral injektáltuk dezaktivált osztott állapotba, heliumot használva hordozógázként.

Az elemzést a as Fiehn-módszer alapján végeztük, és az adatokat kiválasztott ionfigyelő SIM üzemmódban szereztük be, és az egyes biológiai csoportok reprezentatív mintáit is teljes szkennelési módban hajtottuk végre.

Az egyes metabolitok tömeges izotóp eloszlási vektorjai MID normalizálódtak, azaz a metabolit izotóterek bőségének összege egy. GD Tredwell London Imperial College házon belül írták, hogy automatikusan korrigálják a természetben előforduló elemi izotópokat a Millard és munkatársai által leírt módszer alapján.

A számítás két D, G vagy három D, G, E ISA endometrium rák gpc 2020 vonatkozó becsléseket szolgáltatott, amelyek a megszerzett spektrális tömeges izotóp eloszlási adatok és a módszer szekcióban leírt módszerrel szimulált adatok közötti arany bajusz condyloma minimalizálásán alapulnak. A jelöletlen glükóz vagy glutamin szubsztituálva volt egyenletesen 13 C-vel jelölt glükózzal vagy egyenletesen 13 C-vel jelölt glutaminnal, lehetővé téve trichocephalus geohelminth két fő tápanyag sorsának megkülönböztetését.

Míg az MCF10A spontán immortalizálódik, a növekedés elősegítése érdekében a rutin sejttenyészetben általában olyan növekedési faktorokat alkalmazunk, mint az EGF és az inzulin. Mindazonáltal mindkettő a többszörös jelátviteli útvonal kritikus modulátorai, és ezért kívánatos lenne, hogy metabolikus fenotípusukat megfigyeljük az eltávolított adalékokkal.

Így a metabolikus profilozás előtt a táptalajváltozás hatásának kísérleteit, a vad típusú és a mutáns PIK3CA sejtek növekedési fenotípusára a teljes mértékben kiegészítettektől a kiegészítésekig, a proliferációs vizsgálattal értékeltük.

A vad típusú sejtekben a növekedés szignifikáns különbségét 48 órával figyeltük meg S1 ábra. Ezért 24 órát választottunk ki azon időszaknak, amely alatt a metabolomikai kísérleteket végeztük, és a sejtek számát a metabolomikai kísérlet elején és végén mértük S2 ábra. A PIK3CA mutáns csökkenti a piruvát előállítását és növeli a glutamát felszabadulást az MCF10A sejtekben A kultúrában az endometrium rák gpc 2020 környezetben a metabolitkoncentrációk metabolikus visszacsatolást okozhatnak, 25, 26 és szabályozzák a 27, 28 funkcionális fenotípusokat, és így értékes fiziológiai indikátorok.

H-NMR spektroszkópiát alkalmaztunk az U- 13 C-glükóz címkézési kísérletből származó kihasznált tenyésztőközeg elemzésére, amely lehetővé tette számunkra a kulcsfontosságú metabolitok fogyasztási és felszabadulási profiljainak vizsgálatát, beleértve a glükóz, glutamin és kolin felvételét, valamint a termelését.

A piruvát felszabadulás csökkenése ellenére a PIK3CA mutáns sejtekben mind a glükóz-fogyasztás, mind a glükóz-eredetű laktát felszabadulás endometrium rák gpc 2020 maradt, ami arra utal, hogy a piruvát sorsának bármilyen megváltozása a mitokondriumokba vagy az alaninná konvertált piruvátra korlátozódott.

Továbbá, a PIK3CA mutáns sejtekben is befolyásolták a glutamát felszabadulást és a glutamin felvételt. A sejtekbe importált glutamint glutamáton keresztül αKG-re alakítják át a szubsztrátok feltöltéséhez a TCA-ciklusban, és a glutaminolízisről beszámoltak arról, hogy a gyorsan proliferáló tumorsejtekben 29 elősegíti a növekedést és a túlélést.

A rák stádiumainak szövettani osztályozása

Összességében az extracelluláris piruvát, glutamin és glutamát adatai arra utalnak, hogy a metabolikus szubsztrátok bejutása a TCA ciklusba megváltozott a transzformált PIK3CA mutáns sejtekben. Ezen kívül képesek voltunk mérni az extracelluláris kolin felvételét a tenyésztő tápközegben, és nem találtunk szignifikáns különbséget a PIK3CA mutáns és a vad típusú MCF10A szülősejtek között. A negatív értékek a fogyasztást jelzik, és a pozitív értékek nettó effluxot jeleznek; részletes rezonancia-hozzárendelések találhatók a kiegészítő részben.

A sávdiagramok a három független biológiai replikáció átlag ± SEM értékét mutatják.

Anabolikus és katabolikus hormonok

Teljes méretű kép Intracelluláris vizes metabolit-analízis: a PIK3CA transzformált sejtekben megváltozik a piruvát TCA-ciklusba Az U- 13 C6 glükóz és U- 13 C5 glutamin-jelzett tenyészetekből származó intracelluláris metabolitok GC-MS profilozása lehetővé tette számunkra, hogy a PIK3CA mutáns és a nem transzformált sejtek közötti metabolitok viszonylagos mennyiségét szisztematikusan hasonlítsuk össze.

A relatív abundanciájú adatok vizsgálatakor az egyes vizes metabolitok egyes tömeg-izotópjainak nyers intenzitásait összegeztük, és megállapítottuk a glikolitikus intermedierek dihidroxi-aceton-foszfát, PEP, 3PG és a TCA-ciklus köztes termékek αKG, fumarát, malát, glutamát relatív mennyiségét.

Ugyanakkor azt találtuk, hogy a glutamin fontos metabolikus prekurzor a TCA ciklus köztes termékekhez.

Endometrial cancer - causes, symptoms, diagnosis, treatment, pathology

A glutaminolízishez kapcsolódó metabolitok glutamát, αKG, fumarát, malát megnövekedett medenceméretével együtt ezek az adatok azt mutatják, hogy a glutamin fontosabb szén-donor, mint a glükóz a TCA ciklus köztes medencék fenntartásában a mutáns MCF10A sejtekben.

Megfigyeltük továbbá, hogy a szénáram túlnyomórészt a TCA ciklus oxidatív irányában fordult elő, szemben a reduktív karboxilezéssel - amint azt a magasabb glutamin eredetű citrát szint jelöli, mint az M5 jelű citrátot 3a. Míg az U- 13 C5 glutamin mind az öt szénatomja redukáló karboxilezés alatt az M5 citrát izotopomerekbe van beépítve, az M4 jelzésű citrátot az U- 13 C5 glutamin után a TCA ciklus egy fordulata után nyerjük.

endometrium rák gpc 2020 pikkelyes papilloma orr

Továbbá, az egyes metabolitok tömeges izotóp eloszlásainak szoros ellenőrzésével jelentős és jelentős eltolódásokat észleltünk a 13 C glükóz szén mennyiségének citrátba történő beépítésében 3b. A citrát szintézisét rendszerint citrát szintetáz katalizálja, amely szubsztrátként négy-szén-oxalacetátot és két szénatomos acetil-CoA-t alkalmaz.

endometrium rák gpc 2020 nemi szemölcsök a hüvelyen

A mitokondriális acetil-CoA elsősorban piruvátból származik piruvát dehidrogenáz aktivitással, míg az oxaloacetát piruvát karboxilezésével vagy a malát oxidációjával képezhető. Fontos, hogy a piruvát-dehidrogenáz hozzájárul a citrát M2 címkékhez 13C6 glükóz 13C3-piruvát 13C2-citrát és a piruvát-karboxiláz hozzájárul a citrát M3-címkékhez 13C6 glükóz 13C3-piruvát 13C3-oxalacetát 13C3-citrát. Az M2-citrátcímkék növekedése az M3- citrátcímkék csökkenésével együtt azt jelezte, hogy a piruvát-dehidrogenázzal történő piruvát- bevitel a PEG3CA- mutáns MCF10A sejtekben a piruvát-karboxiláz-fluxushoz viszonyítva növekedett.

Minden egyes metabolit esetében az egyes izotópokból származó ionjeleket összegeztük, és a metabolit intenzitási adathordozóját normalizáltuk a medián változás normalizálásával A sávdiagramok az átlag ± SEM. Hét különálló biológiai kísérletet ábrázolnak, és a metabolit jellemzőit a mutáns PIK3CA és a vad típusú szülővonal közötti különbség nagyságrendje szerint rangsorolják, pozitív változással, ami a mutáns növekedését jelenti a vad típusú sejtekhez képest.

Teljes méretű kép A glükóz-nyomkövetési adatokban a a sávdiagramok a glükóz-nyomjelző adatok három különálló biológiai replikációs kísérletének átlag ± SEM-jét képviselik. A glutamin-nyomjelző adatokban b a sávdiagramok a négy különálló biológiai replikációs kísérlet átlag ± SEM értékét képviselik. Teljes méretű kép A lipid fajok elemzése: fokozott de novo lipidszintézis az MCF10A PIK3CA mutánsban Az intracelluláris lipideket GC-MS-vel analizáltuk extrakciós és derivatizációs módszerrel, amely lehetővé tette mind a zsírsav-észterek, mind a szabad zsírsavak kimutatását.

Az észlelt zsírsav-metil-észterek nem korlátozódtak a lipidmolekulák egy bizonyos endometrium rák gpc 2020, hanem minden lipidmolekulából származó zsírsav-láncok, amelyeket a dervitizációs folyamatban átésztereztek.

Ezek az átészterezett zsírsavak különböző lipideket, így például; membránfoszfolipidek foszfatidil-kolin vagy jelző és funkcionális lipidek foszfatidsav vagy diacil-glicerin. Elemzésünk sikeresen mért különböző lipidkötésű zsírsavat, és meg tudtuk vizsgálni számos metil-észter lipidkötésű zsírsavak és a szabad zsírsav-oleaát S2.

Táblázat relatív mennyiségét. Míg az oleaát és a palmitát de novo szintetizálható, a linolenát C 3 az emlőssejtekben esszenciális többszörösen telítetlen zsírsav, és közvetlenül a tenyésztőközegből kell behozni; adataink azt mutatták, hogy a PIK3CA mutáns endometrium rák gpc 2020 lehetséges volt a változás, attól, hogy támaszkodjanak a zsírsavfelvételre és a de novo endometrium rák gpc 2020.

Továbbá az UC6 glükóz és az U- 13 C5 glutamin tömeges izotóp-adatai mind független bizonyítékot szolgáltattak arra vonatkozóan, hogy a zsírsavak de novo- bioszintézisének sebessége emelkedett a PIK3CA mutáns sejtekben.

endometrium rák gpc 2020 paraziták és coveka crevima

Különösen a glükóz és a glutaminból származó két-szén-acetil-CoA egységek fokozott beépülését találtuk metil-palmitátba S5 és S6 ábrákamely az emlőssejtekben a leggyakoribb zsírsav-lánc.

Olvassa el is